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传感器上固化病毒的正确姿势

将传感器应用在与疾病斗争当中,为创造出来这些传感器的科学家致敬!
人类从诞生之日起就开始与病毒做斗争。在这场斗争中,人类取得了阶段性的胜利,已经攻下了病毒的几座山头,一些病毒性疾病有了相应的疫苗或者抗病毒药物,保护人类免受病毒的感染或在感染后能够治好。例如天花病毒,已被人类扔进了历史的“垃圾桶”,几十年来无一例新发病例。在这里我们要感谢那些奋战在一线的科研人员,是他们的付出,才有了我们健康美好的生活,哪有什么岁月静好,只是有人替你负重前行!

史上最危险病毒top10

最危险排名

病毒

1

埃博拉病毒

2

马尔堡病毒

3

艾滋病病毒

4

狂犬病病毒

5

天花病病毒

6

黑死病病毒

7

非典病毒

8

肝炎病毒

9

甲型流感病毒

10

禽流感病毒

    在病毒疫苗和抗病毒的药物研发过程中,我们首先要清楚的是病毒是如何发生和发展的,病毒是如何识别相应的生物分子进入人体或躲过人体免疫的攻击。病毒疫苗与抗病毒药物的研发本质上还是研究分子间的相互作用,传统的ELISA、Western blot、Pulldown等方法,不仅时间长,实验操作繁杂,而且结果重复性差。因此越来越多的客户采用新的、非标记、实时的检测方法BLI技术加快研究的进程。BLI技术可直接固化病毒,实现病毒与病毒受体或中和性抗体的相互作用的快速分析。下面陈老湿就结合目前发表的文献给大家介绍一下如何在BLI平台上直接固化病毒:

不同固化方式的比较

固化方式

优点

缺点

注意项

推荐指数

疏水相互作用

方法简便,直接固化。

样品需纯化,无法进行粗样品的固化。

固化时样品不能包含去污剂以及其他无关蛋白,例如BSA等。

★★★

氨基偶联捕获分子

可固化粗样品中的病毒样品。

需要有特异性的抗体,同时还需要摸索固化抗体的条件。

氨基偶联捕获分子时,样品以及缓冲液中不得包含其他具有氨基基团的物质。

生物素标记病毒

操作简单,实验方法成熟,不需要过多的摸索实验条件。

病毒样品需纯化。

直接标记捕获病毒时,样品和缓冲液中不得含有其他具有竞争基团的物质(例如采用氨基偶联的生物素标记试剂时,不得含有其他具有氨基基团的物质),标记后需去除游离的生物素。

★★★

生物素标记捕获分子

操作简单,实验方法成熟,不需要过多的摸索实验条件,同时可以固化粗样品中的病毒样本。

需要有特异性的抗体。

直接标记捕获病毒时,样品和缓冲液中不得含有其他具有竞争基团的物质(例如采用氨基偶联的生物素标记试剂时,不得含有其他具有氨基基团的物质),标记后需去除游离的生物素。

★★★★★

 

    固化方式1:疏水相互作用(APS传感器)

    文章1:Anti-HIV-1Activity of a New Scorpion Venom Peptide Derivative Kn2-7。

    通过APS传感器直接固化HIV假型病毒,分析HIV假型病毒与蝎毒多肽衍生物Kn2-7的相互作用,从分子角度揭示了蝎毒多肽抗病毒作用的机理。

 

    可见,HIV假病毒可以和阳性多肽Kn2-7结合,而和阴性多肽mucroporin-S1不结合。

 

    固化方式2:氨基偶联(AR2G传感器)

    文章2:Exposureof epitope residues on the outer face of the chikungunya virus envelope trimer determinesantibody neutralizing efficacy。

    AR2G传感器偶联抗CHIKV病毒的人抗E26D9.02,再通过抗体捕获CHIKV病毒样颗粒VLPs,分析与中和抗体IM-CKV063和IM-CKV065的结合活性。

不同抗体与CHIKV病毒的亲和力检测

 

    固化方式3:生物素标记(SA传感器)

    文章3:StructuralBasis for Recognition of Human Enterovirus 71 by a Bivalent BroadlyNeutralizing Monoclonal Antibody。

    该研究采用高分辨率冷冻电镜技术结合生化分析揭示了抗肠道病毒71(EV71)单克隆抗体D5结合以及抑制病毒的结构基础,为基于D5抗体的抗EV71药物开发提供了新思路。文章通过生物素标记病毒EV71固化至SA传感器,分析与D5抗体和Fab的结合。

两种抗体与EV71的亲和力检测

 

    固化方式4:生物素标记捕获凝集素,捕获病毒样颗粒VLPs(SA传感器)

    文章4:Densearray of spikes on HIV-1 virion particles。

    因为病毒表面蛋白很多都是糖基化蛋白,所以可以用凝集素来捕获病毒。而凝集素可以通过生物素化的方式固化在链霉亲和素传感器上。

    该研究通过生物素标记麦胚凝集素固化至SA传感器,捕获病毒样颗粒VLPs,分析与不同抗体的结合情况。

    陈老湿给大家介绍了这么多姿势,研究病毒的小伙伴们,你们正在用哪种姿势呢?欢迎大家使用BLI技术发表更多的文章解锁的姿势。

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未来,希望可以研发出更多高科技的传感器,攻克更多医学难题!

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